?????? 流式細(xì)胞術(shù)的實(shí)驗(yàn)檢測對象是單細(xì)胞懸液。通常被測樣品要求至少有20000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞濃度為105-107個(gè)/mL。
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懸浮/貼壁細(xì)胞
?????? 懸浮細(xì)胞(貼壁細(xì)胞需經(jīng)胰酶消化2-3min顯微鏡觀察細(xì)胞有脫落趨勢即刻棄去胰酶)直接收集細(xì)胞于離心管中。離心后收集沉淀,用PBS重懸,取適量細(xì)胞于EP管中,加入流式抗體后上樣分析。
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外周血
?????? 對于不含中心粒細(xì)胞的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),采用Ficoll密度梯度離心;含中性粒細(xì)胞的外周血白細(xì)胞,先用紅細(xì)胞裂解液(RBC)裂紅,多次低速離心后去除紅細(xì)胞碎片。
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胸水、腹水、腦脊液等體液樣品
?????? 將體液樣本離心,棄上清后PBS重懸,加入流式抗體后即可上樣分析。
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實(shí)體臟器樣品
?????? 先將臟器剪碎后用胰蛋白酶或膠原酶消化組織塊:
胰蛋白酶適于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織,如胚胎、上皮、肝、腎等組織。工作濃度一般為0.1%-0.5%,作用時(shí)間20-60min。
膠原酶適于纖維較多或較硬的癌組織,對組織中膠原蛋白類結(jié)構(gòu)消化作用強(qiáng)。工作濃度一般為0.1-0.3 ug/mL,作用時(shí)間4-48hr。