膜片鉗技術十個技術要點

動作輕柔

      當將micropipette放置到holder上的時候，你可以很容易的在你和放大器（amplifier）“熱”電極之間產(chǎn)生電接觸。如果不與地面電位（electrical ground）連接的話，那么就像是一個巨大的觸角，會引起很大的噪音。這會造成一些放大器的損傷，尤其是如果你聚集了一些靜電噪聲的時候。利用空余的那只手接觸地面，或者在放置微管之前連接金屬絲到地面電位，后者可以在你作為法拉籠（Faraday cage，又稱靜電屏蔽籠，用以防止雜電場對膜片鉗放大器的探頭電路的干擾）一部分的時候減少噪音。

利用少許壓力

      在靠近液體表面和接觸細胞之前要在微管溶液中施以4-6英寸的水壓，這可以通過膜片管holders另外的線路，用嘴更好——一個簡單的U試管。這種電壓能可以讓bath中不留任何碎片，當然吸液管溶液也必須十分干凈。

不用在意吸液管被打碎

       每一步由于對操縱器和光學方面的感覺不同都會有所差別，在將吸液管定位在細胞附近的時候，剛開始總是會打破幾個吸液管的，這是十分正常的。不要因此而沮喪，要分型一下每次做錯的原因，這樣能獲得很快的進步，而且在到下一步的時候依然要重復這個過程。

SUPERFUSION是開還是不開？

       打開Superfusion會導致一些化學物品的浪費，也許是昂貴的藥物，而且會增加吸液管污染的可能性，但是，如果你的細胞并沒有很好的貼在底物上，造成緊密的seal（沒有superfusion），那么打開superfusion，能很容易的調(diào)整細胞，打破密封。另一持續(xù)打開superfusion的原因是微環(huán)境調(diào)控，除非你能很確定穩(wěn)定和pH值不會大幅度的變化，那么還是讓superfusion開著吧。

吸液管大小

       一個孔徑尺寸大的吸液管有利于整個細胞的記錄，這主要是因為用suction pulses容易穿過細胞膜，因此在記錄的過程中不用重新再來，細胞質(zhì)中吸液管溶液也可以很快得以交換。因此在整個細胞記錄過程中吸液管的大小是由獲得seals的成功率決定的，可以盡可能的考慮大尺寸的吸液管，電阻大約是2MΩ。另外小孔徑的吸液管適合于單孔道記錄。

選擇正確的角度

       要進行一次好的密封就需要一次優(yōu)良的接觸，吸液管接觸細胞的角度通常是45度到60度，在放置吸液管的時候，試著選擇細胞上與吸液管軸垂直的部分。這不難，但是在平展的細胞上可能有些難得，有時可以利用由細胞核造成的凸出來完成。而紡錘形狀的細胞則可以以90度來靠近其軸心。

吸出

       在靠近一個擺動檢測脈沖（毫伏）的過程中就說明吸液管“看到”了電阻（電流反應越大電阻越低），接近細胞會增加電阻，降低電流反應。在許多例子中，大約10%的下降就說明要關掉suction，但是不同的細胞類型有不同的情況，而且超壓應用的情況也有影響。也就是說，一旦一種細胞類型建立了可靠穩(wěn)定的規(guī)則，那么就把它記錄下來。從壓力到吸出的轉(zhuǎn)換（通常是由口來完成）應該是快速和順暢的，如果你離開吸液管一會（沒有壓力或者sucion），那細胞膜就會搖擺，污染吸液管口，無法完成良好的seal。

承認錯誤

       如果發(fā)現(xiàn)你監(jiān)控的電阻大幅度降低，那么放棄這一次。你的tip將會被污染，就像上面說的那樣，無法得到好的密封，承認錯誤，用一只新的吸液管重新開始是最節(jié)約時間的方法。

鑒別和去除漂移

      有沒有在利用顯微操作器（micromanipulator）這種低漂移特征的儀器操作時，發(fā)現(xiàn)微吸管在顯微鏡下滑動？在對顯微操作器抱怨之前，你需要確保你的操作器已調(diào)節(jié)減少振動了。漂移有可能是由于操作器裝載過重，或者電纜和與headstage接觸的試管扭轉(zhuǎn)力過大，請盡量避免這些情況的出現(xiàn)。

當鉗出來......

       在完成一個密封（seal）之后，可以加以holding potential。通常你所認為的是一個來自細胞的休眠細胞膜電壓，在吸液管下的膜片將會被去極化，但是一旦你取出，細胞將不再能從放大器里獲得強大的電流jolt。這種鉗出可以通過吸出脈沖（suction pulse）或者電流脈沖（current pulse）完成。吸出對于尺寸大一些的吸液管（<3MΩ）比較合適，而另一個則適合于小吸液管（>6MΩ），中間的范圍需要反復試驗，但是一旦你對你的細胞有了一套方法，那么就堅持下去，有時一些污染會騙了你。用小量持續(xù)的suction，而電流脈沖則可以不斷的增加，如果你看到許多噪音出現(xiàn)，回到原來的suction脈沖。

轉(zhuǎn)自生物通（英國赫特福德郡大學細胞與膜生理學的Areles Molleman原創(chuàng)）