?????? 傳統(tǒng)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑有一定的細(xì)胞毒性，在轉(zhuǎn)染過(guò)程由于提高細(xì)胞的通透性因而不能在培養(yǎng)基中添加抗生素。帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。血清中含有大量的蛋白質(zhì)，在轉(zhuǎn)染過(guò)程中，帶負(fù)電的蛋白質(zhì)可能干擾陽(yáng)離子脂質(zhì)體對(duì)核酸的吸附，影響轉(zhuǎn)染效率。另外，使用脂質(zhì)體等轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，由于含血清轉(zhuǎn)染會(huì)將血清中的蛋白帶入細(xì)胞，引發(fā)細(xì)胞毒性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低，故不能有血清轉(zhuǎn)染。這些轉(zhuǎn)染試劑要求在轉(zhuǎn)染前換無(wú)血清培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基，這其實(shí)是為了減輕轉(zhuǎn)染造成的細(xì)胞毒性。


?????? 不同的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染試劑要求轉(zhuǎn)染的條件是不同 的。最好是在第一次實(shí)驗(yàn)前做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)，比如：HeLa，293，CHO，COS7，MCF－7，HepG2等細(xì)胞，是否加血清，對(duì)不同的細(xì)胞是有不同的影響的，有些細(xì)胞是可以有血清的，有些加血清就會(huì)受影響。所以，普通的轉(zhuǎn)染試劑一定要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，和條件優(yōu)化。


????? 轉(zhuǎn)染后在6小時(shí)左右最好換液且換為有血清的培養(yǎng)基，其一因?yàn)槠胀ㄞD(zhuǎn)染試劑對(duì)細(xì)胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細(xì)胞的死亡。轉(zhuǎn)染時(shí)不加血清是防止血清的干擾作用，轉(zhuǎn)染后可適時(shí)加入。加入過(guò)早會(huì)引起未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)，過(guò)晚會(huì)引起較多細(xì)胞死亡?？蓪?shí)時(shí)觀察1/5細(xì)胞變圓的時(shí)候加入血清。

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