適用范圍和特點(diǎn):
1. 與目前最常用的轉(zhuǎn)染試劑相比,轉(zhuǎn)染效率更高。
2. 可適用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
3. 細(xì)胞毒性低,且可通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染增加蛋白表達(dá)量。
4. 有血清和無血清培養(yǎng)基均可使用,不受介質(zhì)變化的影響,且轉(zhuǎn)染后無需換液。
使用說明:
盡管以下轉(zhuǎn)染的方法已經(jīng)充分的驗(yàn)證過,此試劑具有高效的轉(zhuǎn)染效率,但針對(duì)每種細(xì)胞,還是建議試驗(yàn)人員進(jìn)行條件優(yōu)化,通常要考慮以下問題:
1.細(xì)胞密度:大多數(shù)貼壁細(xì)胞密度在 50-70%之間,適合轉(zhuǎn)染。確定轉(zhuǎn)染最佳的細(xì)胞密度為每一個(gè)細(xì)胞類型的最大效率和維護(hù)密度在所有實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性。
2.培養(yǎng)環(huán)境:含血清的培養(yǎng)基對(duì) UltraFection 3.0 轉(zhuǎn)染無影響。
3.本產(chǎn)品為-20℃保存,使用前建議分裝凍存,盡量避免多次反復(fù)凍存對(duì)轉(zhuǎn)染試劑的影響。
4.DNA 純度和濃度要求:建議選用經(jīng)過離子交換柱制備的高純度、無菌的 DNA,去除 DNA 中內(nèi)毒素的污染是保證最大轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵步驟。以 HEK293 細(xì)胞為例,24 孔板最適 DNA 轉(zhuǎn)染濃度為每孔轉(zhuǎn)染 0.5μg DNA。
5.UltraFection 3.0 和 DNA 的標(biāo)準(zhǔn)比例是 UltraFection 3.0 :DNA=3:1,即 3μl 的 UltraFection 3.0 對(duì)應(yīng)加入 1μg的 DNA。但是推薦客戶根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要自行優(yōu)化范圍,即根據(jù)每 1μg DNA 的量調(diào)節(jié) UltraFection 3.0 加入的量(2-8μl)。